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工业生物技术 (上游)(共二卷) 读者对象:本书适用于生物制造、生化工程、生物制药设备设计、生物化学、工业微生物、基因表达技术和细胞培养技术、上游工业生物技术等相关专业学生
生物技术、新材料和先进工程方法相关的基础理论的最新技术持续被转化、应用于生物工艺之中,以比其他大多数行业更快的速度将新产品推向市场。工业规模生物技术和新的制造方法一直是专业内的主要研究领域,并使得医药,环境监测和修复,消费品、食品生产,农业和林业等产业发生了革命性进步。为了满足最终产品的需求,上游工艺由完整活细胞或最终产物合成所需生物分子。通过逆向工作,细胞或酶被设计为可以产生精确的、具有生物学活性或临床疗效的产品。
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目 录
第一卷 表达系统与工艺开发 第一部分 介 绍 介绍 1 第二部分 工业细胞生长和基因表达系统 第1章 动物细胞,悬浮培养 7 1.1 介绍 7 1.2 悬浮培养大规模生产所用类型 7 1.3 悬浮培养反应器 8 1.4 反应器的操作模式 9 1.5 工艺监测与控制 10 1.6 悬浮培养用培养基 12 1.7 结论 12 第2章 杆状病毒表达载体系统 15 2.1 引言 15 2.2 杆状病毒的结构和复制 15 2.3 重组杆状病毒的制备 16 2.4 杆状病毒转移载体 17 2.5 修饰杆状病毒基因组以提高蛋白质产量 21 2.6 昆虫细胞培养 21 2.7 杆状病毒在哺乳动物细胞中表达外源基因 22 2.8 结论 23 第3章 杆状病毒动力学,昆虫细胞培养 25 3.1 历史与挑战 25 3.2 杆状病毒 26 3.3 细胞产量概念 26 3.4 病毒感染动力学模型:同步感染 27 3.5 病毒感染动力学模型:异步感染 32 第4章 细胞培养,无菌操作技术 37 4.1 简介 37 4.2 无菌技术:一般注意事项 38 4.3 无菌技术:基本规程 39 4.4 高效空气(HEPA)过滤器 41 4.5 采用高效过滤的通风橱和安全柜 43 4.6 单向气流柜和微生物安全柜的使用 45 4.7 Ⅰ级和Ⅱ级微生物安全柜的测试 47 4.8 细胞培养用洁净室 49 第5章 细胞周期在生物工艺中的应用 53 5.1 引言 53 5.2 细胞周期 53 5.3 细胞周期参数的描述方法 57 5.4 细胞周期在生物技术中的重要性 59 第6章 细胞生长及蛋白质表达动力学 64 6.1 简介 64 6.2 分批培养动力学 64 6.3 连续培养动力学 66 6.4 补料分批培养及灌流培养 69 6.5 结论 69 第7章 细胞活力测定 72 7.1 简介 72 7.2 通透性分析 72 7.3 功能分析 73 7.4 流式细胞术 74 7.5 物理方法 75 第8章 动物细胞培养过程中的污染物检测 79 8.1 简介 79 8.2 历史回顾 79 8.3 监管问题 80 8.4 制造和安全检测标准 81 8.5 病毒污染物举例 81 8.6 细胞系中病毒污染物的检测 82 8.7 测试原材料 88 8.8 支原体检测 90 8.9 细菌和真菌 92 8.10 氧摄取率 92 8.11 内毒素检测 92 8.12 统计分析 92 8.13 朊病毒检测 94 8.14 结论 95 第9章 培养物保存和生物资源中心 98 9.1 简介 98 9.2 培养物保藏资金 100 9.3 运营 100 9.4 质量管理 105 9.5 服务 106 9.6 小结 111 第10章 菌种保存 114 10.1 引言 114 10.2 细菌菌株的培养和保存 114 10.3 真菌与酵母菌株的培养与保存 118 10.4 细胞培养物的培养和保存 119 第11章 芽孢杆菌及其他革兰氏阳性菌异源蛋白的表达与分泌 122 11.1 引言 122 11.2 主要工业用菌株 123 11.3 巨大芽孢杆菌 124 11.4 巨大芽孢杆菌实验方案 132 第12章 基因在人细胞的表达 137 12.1 背景 137 12.2 用人细胞系表达基因的安全和监管方面 139 12.3 基因在人细胞系中的表达 140 12.4 人细胞系培养的放大 144 12.5 结束语 144 第13章 基因在毕赤酵母和其他甲醇酵母中的表达 147 13.1 引言 147 13.2 背景 147 13.3 蛋白质表达和优化的策略 148 13.4 发酵工艺 152 13.5 结论和未来展望 155 13.6 培养基组成 156 13.7 毕赤酵母菌株术语 157 第14章 重组动物细胞和转基因动物中的基因表达 161 14.1 引言 161 14.2 综述 161 14.3 动物细胞的质粒表达载体 163 14.4 其他直接转移载体 165 14.5 直接DNA转移 168 14.6 转染方法 174 14.7 病毒表达载体 177 14.8 表达参数和优化:载体和插入序列 189 14.9 表达参数优化——转基因整合的结果 195 14.10 基于重组的方法学及基因抑制策略 201 14.11 转基因哺乳动物细胞产品 208 14.12 转基因动物应用 210 14.13 核移植技术 212 第15章 动物细胞系接种物扩培方法 221 15.1 引言 221 15.2 接种物扩培的过程 221 15.3 细胞库对接种物扩培的影响 225 15.4 接种物扩培的发展趋势 226 15.5 技术转移 228 15.6 结论 228 15.7 产品网站 229 第16章 昆虫细胞培养 231 16.1 引言 231 16.2 昆虫细胞系 231 16.3 病毒 232 16.4 杆状病毒基因表达 233 16.5 重组杆状病毒构建 234 16.6 翻译后加工 235 16.7 应用 237 16.8 大规模工艺:细胞培养或者幼虫生产 237 16.9 结论 244 第17章 微生物生长动力学 247 17.1 引言 247 17.2 生长化学计量学 247 17.3 化学和酶促反应动力学 253 17.4 微生物和细胞生长的简单模型 259 17.5 结构化模型 264 17.6 种群动力学(突变、自选择、质粒转移) 270 17.7 在各种培养系统中微生物的生长 271 第18章 微藻类大规模培养方法 277 18.1 引言 277 18.2 微藻类大规模培养生物反应器 277 18.3 微藻类产量决定因素 282 18.4 管式光生物反应器设计 289 18.5 微藻类大规模培养中的光合效率 292 18.6 操作注意事项 293 18.7 结束语 293 第19章 微生物生长测量 297 19.1 简介 297 19.2 微粒直接计数 299 19.3 菌落计数等同于活菌计数 301 19.4 生物量直接测量法 302 19.5 光散射检测生物量 303 19.6 取样 305 第20章 微生物培养基的组成 307 20.1 引言 307 20.2 基本的营养需求 307 20.3 物理参数 314 20.4 培养基设计与组成 315 20.5 培养基灭菌 321 20.6 培养基保存 322 第21章 细胞的显微鉴定 325 21.1 引言与展望 325 21.2 显微镜的发展与里程碑 325 21.3 光学显微术 326 21.4 激光镊子和剪刀 338 21.5 扫描探针近场显微镜 338 21.6 视频显微术和图像处理 339 21.7 电子显微镜 341 21.8 结论 344 21.9 网站 344 第22章 细胞培养中的支原体污染 348 22.1 支原体的生物学地位及系统命名法 348 22.2 细胞培养中的支原体污染 350 22.3 支原体污染检测 353 22.4 支原体污染的消除 358 22.5 检测、去除及防止支原体污染的工作方案 361 第23章 蛋白质糖基化:分析、鉴定和工程 365 23.1 引言 365 23.2 蛋白质糖基化概述 365 23.3 蛋白质糖基化的作用 368 23.4 分析糖蛋白、糖肽及其附属的糖的技术 369 23.5 重组蛋白药物的糖基化作用 378 23.6 结论 394 第24章 革兰氏阳性菌异源蛋白表达 409 24.1 革兰氏阳性菌通过一般输出途径的蛋白表达 409 24.2 乳酸乳球菌异源蛋白的分泌 410 24.3 表达体系 411 24.4 乳酸乳球菌蛋白分泌 413 24.5 结论 415 第25章 细菌中可溶性蛋白的表达 419 25.1 引言 419 25.2 改变生长条件增加可溶性表达 420 25.3 改变宿主菌株和载体指导可溶性表达 422 25.4 改变蛋白质序列增加可溶性 425 25.5 影响可溶性蛋白得率的生长条件和可变因素 427 25.6 结论和展望 429 第三部分 培养基、细胞系和过程开发 第26章 动物细胞培养基 439 26.1 引言 439 26.2 细胞培养基中的营养物质 440 26.3 基础培养基的发展 441 26.4 补料培养基的开发 444 26.5 产品质量 445 26.6 适当小规模模型和高通量系统的应用 446 26.7 基础培养基和补料培养基优化及实施的工业化考虑 447 26.8 结束语 448 第27章 动物细胞培养,渗透压与温度的效应 452 27.1 细胞微环境渗透压的影响 452 27.2 生物工程系统中温度扰动对细胞生理机能与性能的影响 456 27.3 结论 460 第28章 动物细胞的稳定性 466 28.1 影响内源性基因遗传稳定性的因素 466 28.2 重组细胞系的基因型和表型稳定性 469 28.3 遗传不稳定性对重组蛋白质量的影响 471 28.4 基因型鉴定和遗传稳定性验证 474 第29章 动物细胞分型,杂交瘤 479 29.1 引言 479 29.2 利用体外动物细胞生产单克隆抗体 480 29.3 人抗体生产新方法(体外免疫,人工淋巴结系统) 483 29.4 人用抗体的替代品 483 29.5 展望 484 第30章 重组人抗体的生产 486 30.1 简介 486 30.2 为什么会选择重组抗体并进行生产 487 30.3 使杂交瘤衍生的抗体更人源化 488 30.4 重组人抗体的获得 489 30.5 重组抗体的生产 493 30.6 重组抗体变体 493 30.7 重组抗体的应用 496 30.8 展望 497 第31章 消泡剂与普郎尼克多元醇,细胞保护 498 31.1 引言 498 31.2 普郎尼克多元醇的性能 498 31.3 普郎尼克多元醇的保护作用 499 31.4 应用 500 第32章 生物反应器的小型化 502 32.1 引言 502 32.2 生物反应器的监控工具 502 32.3 生物反应器静态系统 503 32.4 微加工生物反应器 503 32.5 生物反应器震荡系统 504 32.6 生物反应器搅拌系统 512 32.7 生物反应器 515 32.8 对流混合的其他方法 521 32.9 结论 521 第33章 接种物的制备 524 33.1 简介 524 33.2 培养基储备 524 33.3 菌种保藏 525 33.4 菌种评估 526 33.5 接种物扩大培养 527 33.6 接种/种子转移标准 529 33.7 接种物制备方法的研究 529 33.8 接种发展概要 530 第34章 微载体培养 532 34.1 历史和发展 532 34.2 细胞培养 533 34.3 微载体在疫苗生产上的应用 541 34.4 微载体在重组蛋白生产上的应用 542 34.5 微载体培养的发展前景 545 34.6 结论 545 第35章 单克隆抗体生产,细胞系 548 35.1 引言 548 35.2 细胞系的作用 548 35.3 大部分常用哺乳动物细胞系和载体系统的特征 551 35.4 其他宿主平台 554 35.5 结束语 556 第36章 植物细胞培养及实验技术 559 36.1 引言 559 36.2 实验设备 559 36.3 植物细胞培养基 560 36.4 细胞培养体系 564 36.5 小结 566 第37章 生物技术工艺的放大 568 37.1 引言 568 37.2 量纲分析 568 37.3 PI定理 570 37.4 矩阵算法证明PI 数列 570 37.5 模拟和放大理论的基本原理 572 37.6 建立相关列表的进一步程序 572 37.7 量纲分析和放大要素的小结 577 37.8 通过量纲分析处理可变物理性质 578 37.9 热传递过程的量纲分析 582 37.10 传质过程的量纲分析 584 第二卷 设备、工艺设计、传感、控制与cGMP实施 第四部分 生物反应器设计、工程、传感和控制过程 第38章 动物细胞生物反应器的通气、混合与流体动力学 589 38.1 引言 589 38.2 通气 589 38.3 混合 595 38.4 动物细胞与水动力的关系 599 38.5 概述 607 第39章 生物催化膜反应器 613 39.1 引言 613 39.2 基本原理 614 39.3 膜反应器结构 616 39.4 应用 620 39.5 其他膜生物反应器的应用 627 39.6 结论 628 第40章 生物反应器按比例缩小 630 40.1 按比例缩小的方法 631 40.2 模式分析 632 40.3 模拟 633 40.4 优化和建模 633 40.5 应用 634 40.6 微生物发酵中的按比例缩小研究 635 40.7 按比例缩小研究的试验装置 636 40.8 底物或pH梯度模拟 638 40.9 同步环境梯度模拟 638 第41章 生物反应器线性放大* 641 41.1 引言 641 41.2 高径比、均质性和梯度 642 41.3 加热和冷却 649 第42章 生物反应器:气升式反应器 659 42.1 引言 659 42.2 流体动力学 661 42.3 传质 678 42.4 传热 682 42.5 多相气升式反应器 683 42.6 选择和设计 685 42.7 模型 696 42.8 生物工艺 699 42.9 总结 702 第43章 生物反应器,连续培养,植物细胞 713 43.1 引言 713 43.2 连续培养理论的假设和缺陷 714 43.3 连续培养的实际方案 714 43.4 连续培养的数学描述 715 43.5 连续培养在植物细胞中的应用 716 第44章 生物反应器,流化床 719 44.1 历史介绍 719 44.2 工厂设计和运行 721 44.3 放大的考量 727 44.4 建模与模拟 727 44.5 实例 728 第45章 生物反应器,气体处理 731 45.1 引言 731 45.2 微生物与应用 731 45.3 生物反应器的类型 732 45.4 生物反应器的设计 734 第46章 生物反应器,灌流 743 46.1 引言 743 46.2 基于过滤法的细胞截留 744 46.3 基于沉淀法的细胞截留 748 46.4 结论 753 第47章 旋转式生物反应器 755 47.1 引言 755 47.2 背景 755 47.3 结论和展望 766 第48章 植物细胞培养生物反应器,搅拌罐 768 48.1 悬浮植物细胞培养的产物 768 48.2 悬浮植物细胞培养的性质:生物反应器工程的含义 768 48.3 搅拌式悬浮植物细胞培养生物反应器的适用性 769 48.4 搅拌罐的设备和操作特点 770 48.5 生物反应器中的植物细胞培养:实验结果 784 48.6 搅拌型生物反应器中的植物细胞培养:理论分析 791 48.7 结论 792 第49章 细胞固定化,工程展望 797 49.1 引言 797 49.2 内部传质 797 49.3 外部传质 810 49.4 反应和扩散 811 第50章 发酵罐/生物反应器设计 823 50.1 引言 823 50.2 安全性和法规适用性 823 50.3 设计基础和其他一般注意事项 825 50.4 工艺要求:基础 826 50.5 机械设计 836 50.6 结论 846 第51章 生物反应罐持气率 848 51.1 基本定义 848 51.2 生物技术相关性 848 51.3 决定持气率的因素 850 51.4 物理化学影响 851 51.5 测量技术 852 第52章 蛋白质与酶的固定化,介孔载体 854 52.1 引言 854 52.2 介孔硅和碳上的蛋白质固定化 854 52.3 结论及展望 872 第53章 固定化细胞 877 53.1 引言 877 53.2 细胞固定化:载体和技术 877 53.3 细胞微胶囊 879 53.4 细胞固定化要求 880 53.5 用于细胞固定化的生物材料 881 53.6 细胞固定化技术 883 53.7 固定化对细胞的影响 886 53.8 反应器的设计 887 53.9 结论 888 第54章 固定化酶 892 54.1 引言 892 54.2 固定化酶作为工业化学过程的催化剂 892 54.3 目前固定化酶的工业化应用 893 54.4 固定化方案 894 54.5 工业酶吸附于离子交换介质上 894 54.6 脂肪酶在疏水性基质上的选择性吸附 894 54.7 生物亲和固定化 895 54.8 共价固定 896 54.9 无载体固定化酶 898 54.10 通过固定化技术进行酶性质的改良 899 54.11 通过不同的固定化方法进行脂肪酶的选择性调节 901 54.12 展望:固定化酶作用于不溶性底物 901 54.13 结论 902 第55章 叶轮选择,动物细胞培养 905 55.1 引言 905 55.2 影响叶轮选择的最重要因素 905 55.3 氧传递因素 906 55.4 “剪切敏感性”对叶轮产生的流体动力学压力 906 55.5 其他取决于搅拌和生物反应器结构的参数:对叶轮选择的启示 910 55.6 与叶轮选择无关的重要参数 912 55.7 叶轮选择/几何、规模放大和操作策略 912 第56章 哺乳动物细胞生物反应器 915 56.1 引言 915 56.2 反应器基本操作和动力学 916 56.3 搅拌罐的细胞载体 917 56.4 细胞培养反应器 918 56.5 结束语 922 第57章 哺乳动物细胞生物反应器,放大 923 57.1 引言 923 57.2 背景 924 57.3 贴壁依赖性细胞生物反应器 926 57.4 悬浮细胞生物反应器 928 57.5 高细胞密度生物反应器 930 57.6 对比、总结及展望 931 第58章 传质 935 58.1 引言 935 58.2 扩散系数或扩散率 935 58.3 气-液传质 936 58.4 液-液传质 939 58.5 固-液传质 940 58.6 传质行为 940 第59章 传氧速率的测定方法 966 59.1 引言 966 59.2 kLa的实验测定 968 59.3 由不同方法获得的kLa值的比较 974 59.4 kLa 值之间的相关性 975 59.5 预测OTR的一般方法 978 59.6 微型生物反应器(小型和微型设备)中的OTR 979 59.7 结论 980 第60章 光生物反应器 984 60.1 引言 984 60.2 光生物反应器类别 986 60.3 大型商业化光生物反应器 993 60.4 结语与展望 995 60.5 结论 996 第61章 发酵液的流变学行为 1000 61.1 引言 1000 61.2 流变学模型 1000 61.3 流变仪 1000 61.4 胞外生物聚合物发酵 1002 61.5 菌丝体发酵 1003 61.6 混合 1007 61.7 结论 1007 第62章 丝状微生物流变学,深层培养 1009 62.1 引言 1009 62.2 丝状微生物发酵液的流变测量 1010 62.3 流变学模型 1011 62.4 黏度作为丝状微生物发酵的一个工程问题 1012 62.5 黏度系数作为悬浮特征的函数 1014 62.6 丝状微生物发酵流变性的控制 1017 62.7 非牛顿流体发酵液流变性测量设备 1019 62.8 总结 1019 第63章 过程控制中的取样和样品处理 1023 63.1 取样 1023 63.2 化学法 1024 63.3 物理法 1024 63.4 化学法 1025 63.5 从气相中取样 1025 63.6 代表性样品 1025 63.7 取样的重现性 1025 63.8 样品处理 1026 63.9 无损检测方法 1027 63.10 集成过程 1028 63.11 商业系统 1028 63.12 总结 1029 第64章 固态发酵,动力学 1030 64.1 引言 1030 64.2 本章目标 1030 64.3 研究内容和研究范围 1031 64.4 固态发酵关键特性描述 1031 64.5 微生物现象的建模 1034 64.6 局部传递现象的建模 1037 64.7 大规模传递现象的建模 1038 64.8 参数估计 1045 64.9 总结与展望 1046 第65章 自动化固态发酵 1049 65.1 引言 1049 65.2 关键操作变量的测量和控制 1049 65.3 商业规模的SSF 生物反应器的自动控制策略 1052 65.4 案例研究:试验型定期混合的填充层生物反应器的自动化 1053 第66章 不锈钢 1059 66.1 不锈钢的本质 1059 66.2 不锈钢的类型 1059 66.3 腐蚀机制 1059 66.4 不锈钢的腐蚀敏感性 1060 66.5 局部腐蚀的形式 1060 66.6 造成局部腐蚀的因素 1062 66.7 预防局部腐蚀 1062 66.8 补救措施 1063 66.9 标准操作程序 1064 第67章 静态混合,发酵工艺 1065 67.1 引言 1065 67.2 结构类型和构造 1065 67.3 对动量传递的影响 1067 67.4 存在于静态混合器中的传质 1072 67.5 静态混合器与传热 1074 67.6 放大设计 1075 67.7 结束语 1075 第68章 多相系统中的传递现象 1077 68.1 引言 1077 68.2 改进的Rushton涡轮搅拌器的描述 1077 68.3 多相系统流体力学 1078 68.4 物质传递 1085 68.5 抗生素生物合成中的改良搅拌器性能 1087 第五部分 过程分析技术(PAT) 第69章 生物过程和发酵监测 1093 69.1 引言 1093 69.2 传感器和监测的各个方面 1093 69.3 监控方法 1095 69.4 传感器、装置和技术 1095 69.5 结论 1107 第70章 流动注射分析在工业生物技术中的应用 1109 70.1 引言 1109 70.2 流动注射分析基本原理 1110 70.3 利用FI进行选择性生物分析应用 1111 70.4 FI在分析或检测过程中的用途 1113 70.5 顺序注射分析基础 1113 70.6 微流体装置:阀上实验室 1114 70.7 所选的生物分析应用开发SI-LOV 1115 70.8 结论和前景 1118 第71章 用于生物过程监测的荧光技术 1121 71.1 引言 1121 71.2 用于生物过程监测的在线荧光传感器的原理 1121 71.3 在线二维荧光光谱的应用 1128 71.4 总结 1129 第72章 动物细胞培养过程中的离线分析 1130 72.1 引言 1130 72.2 细胞密度的分析 1131 72.3 培养基成分的分析 1132 72.4 代谢终产物的分析 1138 72.5 其他物质和参数的分析 1140 72.6 蛋白质的分析 1141 72.7 临床分析器的分析 1141 72.8 服务信息 1142 第73章 过程分析技术:对于生物药剂学的策略 1144 73.1 引言 1144 73.2 PAT应用于上游操作 1147 73.3 PAT应用于收获操作 1149 73.4 PAT应用于下游操作 1150 73.5 PAT应用于药品生产操作 1152 73.6 PAT和快速的微生物学方法 1154 73.7 PAT在化学计量学中的应用 1154 73.8 关于PAT实现的案例研究 1155 73.9 结论和展望 1156 第74章 废气分析 1160 74.1 概述 1160 74.2 废气分析的方法 1160 74.3 安装与操作 1165 74.4 参数计算 1168 第六部分 上游cGMP实施 第75章 抗体制备,一次性系统 1175 75.1 引言 1175 75.2 抗体产业中一次性设备的应用:综述 1175 75.3 单抗生产过程中一次性反应器的应用 1177 75.4 讨论及显而易见的趋势 1179 第76章 生物反应器操作 1182 76.1 准备 1182 76.2 灭菌 1197 76.3 装料 1202 76.4 培养初始阶段 1207 76.5 收获 1208 第77章 生物反应器,细胞培养,商品化产品 1211 77.1 引言 1211 77.2 生物反应器的设计 1217 77.3 程序操作 1220 77.4 产品生产规模扩大化 1227 77.5 结论 1228 第78章 生物转化,工艺优化 1234 78.1 引言 1234 78.2 全细胞还是纯化酶? 1234 78.3 反应器分类 1235 78.4 逐步工艺开发步骤 1236 78.5 例子 1237 第79章 生物反应器中的泡沫生成与控制 1244 79.1 泡沫产生原理概述 1244 79.2 微观水平下描述泡沫:界面的分子机制 1244 79.3 宏观水平上对泡沫的描述:反应器中气-液分散 1245 79.4 溶液发泡性能的评价方法 1246 79.5 生物过程中泡沫的检测与控制 1247 79.6 用于预防泡沫的化学方法 1247 79.7 物理法预防或减少反应器中泡沫生成 1249 79.8 泡沫的生成与预防的影响 1251 79.9 生物反应过程中的泡沫:现有回顾与未来展望 1252 第80章 中试车间的设计和运营 1254 80.1 引言 1254 80.2 运营理念和工艺需求 1254 80.3 设计 1255 80.4 运营 1264 第81章 剪切敏感性 1272 81.1 引言 1272 81.2 生物反应器中的剪切力 1272 81.3 剪切效应 1278 81.4 结束语 1297 第82章 生物加工过程中设备的灭菌和消毒 1303 82.1 引言 1303 82.2 加热灭菌 1303 82.3 过滤除菌 1306 82.4 熏蒸 1308 82.5 γ辐射 1309 82.6 紫外线 1309 82.7 液体消毒剂 1309 82.8 病毒检测与生物制品的消毒 1310 82.9 朊病毒 1313 82.10 监管和安全问题 1314 索引 1317
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